鈣黃綠素染色步驟說明：
 
鈣黃綠素（Calcein）用于絡合指示劑熒光指示劑等領域。其鈉鹽為橙紅色結(jié)晶，溶于水，呈黃色而有綠色熒光，不溶于無水乙醇和乙醚。以下為鈣黃綠素染色步驟，僅供參考。
 
鈣黃綠素染色步驟：
1、用DMSO制備1 mM 的鈣黃綠素溶液，并用PBS將其稀釋制成1～50 μM的鈣黃綠素溶液。
2、將1/10細胞培養(yǎng)基體積的鈣黃綠素溶液加入到細胞培養(yǎng)基中。
3、在37℃培養(yǎng)細胞15-30分鐘。
4、用PBS或適當?shù)木彌_液洗滌細胞兩次。
5、用490 nm激發(fā)波長，515 nm發(fā)射波長的濾光片的熒光顯微鏡觀察細胞。
a、如果鈣黃綠素溶液很難進入細胞，可以使用表面活性劑，如Pluronic F127。
b、或者您也可以用1/10濃度的Calcein-AM溶液代替培養(yǎng)基。
 
用途：絡合指示劑。熒光指示劑。測定鈣、鍶、鋇、銅和錳。鈣黃綠素，Calcein另外在核酸擴增過程中會形成大量的焦磷酸根離子。熒光染料中的錳離子與鈣黃綠素結(jié)合導致熒光淬滅，同時染料顏色為橙色。當擴增反應形成焦磷酸根離子時，錳離子與焦磷酸根離子結(jié)合形成焦磷酸錳，引起熒光信號的產(chǎn)生，同時染料顏色變?yōu)辄S綠色。鈣黃綠素目前已廣泛應用于恒溫擴增反應的熒光檢測。
 
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