精品人妻少妇一区二区老女人-天天射天天操天天插天天日天天干-91资源一区二区熟妇-日韩午夜免费av在线

?藍(lán)白斑篩選中IPTG和X-gal的工作原理和使用方法


細(xì)菌藍(lán)白斑篩選原理:
IPTG為安慰型誘導(dǎo)物,可誘導(dǎo)β-半乳糖苷酶的產(chǎn)生,X-gal是β-半乳糖苷酶的作用底物,在β-半乳糖苷酶的作用下X-gal被切割成半乳糖和深藍(lán)色的物質(zhì):5-溴-4-靛藍(lán),有色物質(zhì)可使所在的菌落呈現(xiàn)藍(lán)色。
但當(dāng)含有l(wèi)ac啟動(dòng)子的質(zhì)粒中插入了外源基因,則不能產(chǎn)生β-半乳糖苷酶,因此不能分解X-gal產(chǎn)生藍(lán)色底物,所在的菌落呈現(xiàn)白色(相對藍(lán)色),這樣的菌落才有可能是我們想要的菌株。藍(lán)白斑篩選減輕了在篩選陽性克隆菌落時(shí)的工作量。
 
使用濃度:
IPTG濃度:50mg/ml;X-gal濃度:20mg/ml
 
直接涂板法:
取IPTG溶液10l,X-gal溶液20l滴在培養(yǎng)基上,同時(shí)滴加50~100l無菌水或無菌LB,用涂布棒涂抹均勻,放至表面無水后即可使用。
 
預(yù)制板:
倒板時(shí),在溫度降至50℃后。每100mlLB中加入250l的IPTG溶液和500?l的X-gal溶液,混勻后制板即可。
 
注意:
1、X-gal不溶于水,用二甲基甲酰胺(DMF)溶解;
2、X-gal對光敏感,含有X-gal的平板應(yīng)該避光保存,在1~2周內(nèi)使用;
3、過夜培養(yǎng)后藍(lán)白斑顯示不明顯可將平板放入4℃冰箱中,一段時(shí)間后藍(lán)白斑顯示會(huì)比較明顯,便于挑選。
 
素材來源于網(wǎng)絡(luò)。
想了解更多生化試劑知識(shí),敬請關(guān)注“湖南韻邦生物醫(yī)藥有限公司”官方網(wǎng)站:http://www.hunanyunbang.com/
(本網(wǎng)站所有內(nèi)容,凡注明來源為“湖南韻邦”,版權(quán)均歸湖南韻邦所有,未經(jīng)授權(quán),任何媒體、網(wǎng)站或個(gè)人不得轉(zhuǎn)載,否則將追究法律責(zé)任,授權(quán)轉(zhuǎn)載時(shí)須注明來源:“湖南韻邦”。本網(wǎng)注明來源為其他媒體的內(nèi)容為轉(zhuǎn)載,轉(zhuǎn)載僅作觀點(diǎn)分享,版權(quán)歸原作者所有,如有侵犯版權(quán),請及時(shí)聯(lián)系我們。)
已經(jīng)到最底了
展開